Располагался в г. Осташкове (Тверская обл.).
В 1-й пол. XVII в. в Осташковских слободах сложился небольшой кружок женщин, желавших посвятить себя иноческой жизни (Успенский. 1890. С. 4). Поскольку в округе не было жен. мон-ря, то они жили поблизости от приходских храмов слобод, просили подаяния, зарабатывали на жизнь рукоделием. Они носили монашескую одежду, давали обет безбрачия и не употребляли в пищу мяса. Три старицы: Евпраксия Волговская, Фотиния из Трестина и Марина Безногая - упоминаются в синодике Ниловой Столобенской в честь Богоявления мужской пустыни 1638 г. как сделавшие вклад на поминовение (Там же. С. 4-5). К 1656 г. таких инокинь было уже 23; при проезде через Осташковские слободы патриарх Никон (Минов) пожаловал каждой из них по «гривне». К 70-м гг. XVII в. численность «монахинь» достигла 30, и они приняли решение организовать в Осташковских слободах жен. мон-рь.
Для основания обители по согласованию с жителями Осташковских слобод была выбрана территория т. н. Старого Струговища, где в XVII в. находились кладбище для погребения «странных» и «убогих» и часовня (именовалась Дальней, Убогий Дом). У осташковских стариц была почитаемая икона Божией Матери «Знамение», к-рой они и решили посвятить обитель.
Испросив благословение патриарха Питирима, 4 мая 1673 г. старицы обратились с прошением об устроении мон-ря к царю Алексею Михайловичу (Ист. записка. 1852. С. 4-6). Грамотой от 12 июня 1673 г. осташковскому воеводе И. И. Еврееву царь предписал объявить о своем согласии на устроение обители (Там же. С. 6-8), одновременно благословение дал митр. Сарский и Подонский Павел (Там же. С. 8-10). 25 сент. Евреев отвел старицам под строительство мон-ря землю.
Указом Московской духовной дикастерии от 22 янв. 1725 г. к О. З. м. были приписаны ржевский в честь Рождества Христова жен. мон-рь и Преображения Господня на Рогоже жен. мон-рь (Пелагеина пустынь) близ Осташкова (Успенский. 1890. С. 19). В результате прошений насельниц Пелагеиной пуст. она в итоге была отдана под начало игумении О. З. м., но не упразднена (в 1764 упразднена, храм обращен в приходский).
При введении в 1764 г. монастырских штатов О. З. м. отнесен к обителям 3-го класса.
В 1844-1868 гг. и с 1888 г. в О. З. м. действовал приют для бедных девиц из духовного сословия (в разное время в нем проживали от 9 до 18 чел.).
Во время грандиозного пожара в Осташкове, 8 июня 1868 г., комплекс мон-ря значительно пострадал: практически все деревянные строения были уничтожены, почти полностью выгорели внутри храмы обители. Лишь благодаря крупным частным пожертвованиям мон-рь удалось достаточно быстро восстановить. Важнейшую роль в этом сыграла супруга городского головы П. И. Савина (урожд. Куликова, в 1-м браке Орлова; 1815-1900).
В нояб. 1918 г. для проведения в жизнь декрета «Об отделении церкви от государства и школы от церкви» в Осташкове организована комиссия при уездном ЦИК (Глафирова. 2017. С. 74). В мон-ре в нач. 20-х гг. XX в. были созданы община (включала 147 монахинь и 49 мирян; преобладали насельницы, прожившие в О. З. м. 35-50 лет (Там же)) и трудовая коммуна. Еще до окончательного закрытия обители в настоятельском корпусе разместился детский приют (67 воспитанниц и 17 служащих), часть келий была отдана под жилье для рабочих и служащих (впосл. т. н. Рабочий городок) (Там же. С. 79). В 1928 г., после закрытия Вознесенского собора, О. З. м. прекратил существование.
Первой игуменией обители в 1673 г. была избрана Евпраксия (Волговская), проживавшая в Пелагеиной пуст. 22 марта 1674 г. она получила благословение митр. Сарского и Подонского Павла и была возведена в сан игумении (Ист. записка. 1852. С. 12; Успенский. 1890. С. 10; возглавляла обитель до 1691). Ее преемницы: игумении Пелагия (со 2 июня 1691), Сусанна (с 5 авг. 1696 (Ист. записка. 1852. С. 19) или 6 авг. 1697 (Успенский. 1890. С. 64)), Неонилла (1701-1722), Дорофея (1722-1724), Евфимия (Шатилова; 8 янв. 1725 - 1 марта 1750), Олимпиада (Пожогина-Отрошкевич; 1750-1757, 1759 - 24 авг. 1794), Евпраксия (Шишмарёва; 11 дек. 1794 - 1812), Евстолия (Мартинова; 20 февр. 1812 - 1837), Мария (Игнатьева; 1837-1849), Агния (Толстая; 1849-1881), Ольга (Жуковская; 1881 - 15 авг. 1887) (Там же. С. 64-67), Антония (Ушакова) (1887-1891), Аполлинария (Банина; 1891-1894), Еликонида (1894-1911), Маргарита (1911 - не ранее 1917). Последней настоятельницей мон-ря стала игум. Екатерина (Дюкова; не ранее 1917 - 1928), обвиненная в 1931 г. в контрреволюционной деятельности и высланная на 3 года в Казахстан (ее дальнейшая судьба неизв.).
После упразднения в 1725 г. ржевского в честь Рождества Христова жен. мон-ря в О. З. м. были переведены 12 его насельниц. После закрытия в 1764 г. Пелагеиной пуст. игум. Александра, казначея Матрона, монахини Марфа и Феодора перешли в О. З. м. и были приняты в число насельниц сверх штата.
Численность насельниц мон-ря составляла: свыше 50 чел. (1725), 210 чел. (из них 175 послушниц; 1901), 128 чел. (из них 92 послушницы; 1907), 147 чел. (1919).
В 1678-1764 гг. О. З. м. получал ругу хлебом, столовыми припасами и «церковными потребами» (Успенский. 1890. С. 12, 68). После причисления обители к 3-му классу установлено ежегодное содержание О. З. м. в размере 375 р. 60 к. (Там же. С. 71), в 1797 г. имп. Павлом I Петровичем оно увеличено на 435 р. (Там же. С. 33), к 1901 г. составляло 337 р. 43 к. (Добровольский. 1901. С. 624).
Формирование земельных владений обители началось с 80-х гг. XVII в. Грамотой от 1 сент. 1683 г. патриарх Иоаким (Савёлов) выделил О. З. м. землю под огороды близ обители, затем в том же году пожаловал обители о-в Попов в Котицком плесе оз. Селигер, замененный по грамоте от 25 февр. 1696 г. на о-в Ивановский. Грамотой от 1 июля 1700 г. патриарх Адриан пожаловал О. З. м. о-в Перетерье в Сосницком плесе на 10 лет без оброка (с 1714 принадлежал обители на условиях выплаты оброка) (Успенский. 1890. С. 13. Примеч. 4). При проведении секуляризации церковных имуществ О. З. м. благодаря усилиям игум. Олимпиады сохранил принадлежавшие ему островки на оз. Селигер.
В 1799 г. владения О. З. м. расширились, он получил пустошь Николаевскую на р. Тихвине (свыше 19 га) близ Голенкова погоста Горышинской вол. Осташковского у. (ныне дер. Голенково-Погост Селижаровского р-на Тверской обл.), мельницу на р. Песочне при впадении ее в Волгу близ посада Селижарово, рыбные ловли на Волге (в окрестностях дер. Починок и в оз. Волосец) (Там же. С. 33; Добровольский. 1901. С. 624). В 1844 г. повелением имп. Николая I Павловича обители была выделена лесная Петропавловская дача в Осташковском у. (свыше 47 га).
В XIX в. расширялись владения обители в Осташкове. В 1846 г. Н. Е. Игнатьева пожаловала О. З. м. дом с землей, в 1853 г. осташковские мещанки, сестры П. Е. Беляева, С. Е. Соколова и П. Е. Ревенкова, пожертвовали еще один дом с половиной смежного с предыдущим участка. О. З. м. принадлежали также 12 пустопорожних мест в 51-м квартале (10 из них поступили в 1858, по записи 1856 г., от потомственной почетной гражданки А. Е. Пальцовой, 2 - от помещицы Новгородской губ. М. И. Кемецкой) и 5 пустопорожних мест в 97-м квартале (4 из них пожалованы в 1865 Кемецкой, 1 - осташковским мещанином И. И. Коробановым и его сестрой А. И. Корнышовой) (Успенский. 1890. С. 72-73). На пустопорожних местах были размещены монастырские огороды. В 1850 г. в О. З. м. поступил билет сохранной казны на 5 тыс. р. серебром по завещанию гр. А. А. Орловой-Чесменской (Ист. записка. 1852. С. 39). К 1901 г. монастырский капитал составлял 78 614 р. в кредитных билетах (Добровольский. 1901. С. 624).
В 1918 г. все земельные владения мон-ря за пределами Осташкова были национализированы и поступили в ведение уездного и волостных комитетов.
Среди наиболее ценных книг в собрании О. З. м. в кон. XIX в. отмечены: печатные Триодь Цветная (1670, вклад боярина Б. М. Хитрово), Шестоднев (1678), а также комплект Миней-Четьих (1689-1691), пожалованный обители митр. Сарским и Подонским Евфимием (Рылковым) (Успенский. 1890. С. 62-63).
Сохранился фрагментарно, незначительная его часть находится в ГАТвО (Ф. 197).
Главной святыней мон-ря являлась икона Божией Матери «Знамение». Икона была декорирована богато украшенной ризой, в 1844 г. на средства послушницы В. П. Обрютиной изготовили новую серебряную чеканную позолоченную ризу. До 1831 г. икону украшал дорогой жемчужный убрус с венцом из драгоценных камней, пожалованный в О. З. м. в XVIII в. П. А. Соймоновой; в 1831 г. он был обновлен послушницей М. П. Крюковой (впосл. мон. Мамелхва). Икона хранилась в дубовом киоте с верхом в виде 5-главой церкви (работа московского мастера Н. И. Ахапкина, 80-е гг. XIX в. (Успенский. 1890. С. 52)).
В 1844 г. был выполнен список с иконы Божией Матери «Знамение», на к-рый была помещена риза с главной святыни обители.
Еще одной святыней обители являлась Тихвинская икона Божией Матери (по преданию, список XVII в.), пожертвованная в монастырь А. Н. Стрешневой в 80-х гг. XVIII в. (Там же. С. 31).
В 1872 г. из Свято-Пантелеимонова мон-ря на Афоне в О. З. м. привезли икону Божией Матери «Скоропослушница». Ее поместили в теплый Вознесенский собор в придел Усекновения главы Иоанна Предтечи.
В приделе в честь иконы Божией Матери «Знамение» находилась икона Христа Спасителя (по всей вероятности, написанная не позднее XVI в.) (Там же. С. 59-61).
В 1889 г. в О. З. м. с Афона была прислана икона вмч. Пантелеимона (Там же. С. 54).
В ризнице мон-ря хранились: вызолоченный серебряный потир, вложенный в обитель одним из крупнейших российских предпринимателей 2-й пол. XVIII в., уроженцем Осташковской бобыльской слободы С. Я. Яковлевым в 1778 г.; серебряные вызолоченные богослужебные сосуды, переделанные в 1846 г. тщанием игум. Марии из ветхих 2 потиров и дарохранительницы; серебряный вызолоченный ковшичек, вложенный Н. Н. Шереметевой (урожд. Тютчевой) (Там же. С. 61).
На колокольне среди прочих находился колокол весом 10 пудов (163,8 кг), подаренный обители архимандритом Чудова мон-ря Евфимием (Рылковым) 20 янв. 1687 г.
Вплоть до 30-х гг. XVIII в. все здания обители были деревянными.
I. Первый храм в честь иконы Божией Матери «Знамение» был построен вскоре после основания обители, один из его приделов был освящен во имя прор. Илии, однако этот придел просуществовал немногим более 10 лет. По благословению патриарха Иоакима (грамота от 5 марта 1686) началось строительство деревянного храма в честь Вознесения Господня с приделом в честь иконы Божией Матери «Знамение». В 1730 г. было принято решение о постройке каменного собора, его сооружение велось с 1731 по 1748 г. Разрешение на строительство было выдано синодальным Казенным приказом 11 февр. 1731 г. (Там же. С. 22). Первым на средства жертвователей (среди к-рых была и имп. Анна Иоанновна) был поставлен теплый трапезный храм, в кон. 1734 г. игумен Ниловой Столобенской пуст. Авраамий освятил его приделы в честь иконы Божией Матери «Знамение» и в честь Усекновения главы Иоанна Предтечи (Там же). К 1748 г. по сторонам теплого храма были возведены основной одноглавый объем летнего собора по типу восьмерик на четверике и колокольня, составившие единый ансамбль. Значительные средства на постройку собора внесли имп. Елизавета Петровна, А. Л. Апраксина (урожд. Соймонова), П. А. Соймонова. 2 июля 1748 г. архиеп. Тверской Митрофан (Слотвинский) освятил главный престол в честь Вознесения Господня. В 1750 г. в храме установлен резной золоченый иконостас. В 1780 г. перестроено завершение собора: над восьмериком по сторонам были возведены 4 полукруглых фронтона и 4 небольшие главки над ними, т. о., собор стал 5-главым. К кон. XVIII в. на колокольне было 8 колоколов.
В 1803 г. в соборе вместо иконостаса 1750 г. устроен новый, подрядчиком его изготовления стал осташковский купец А. Шолохов, а золочения - осташковский купец Т. С. Глазухин. В 1814 г. новый иконостас был установлен в приделе Усекновения главы Иоанна Предтечи. Во 2-й пол. 10-х гг. XIX в. трапезная собора была частично перестроена, после чего в 1820 г. в обновленном приделе иконы Божией Матери «Знамение» также был установлен новый иконостас (на средства В. П. Обрютиной, в 1832 ставшей послушницей обители), а прежний был продан за 200 р. в погост Черенчицы Старорусского у. Новгородской губ. В 1825 г. собор был расписан. В 1829 г. на средства М. П. Крюковой (впосл. мон. Мамелхва) была расширена в длину и высоту алтарная часть собора. 13 сент. 1835 г. главный престол вновь освящен архиеп. Тверским Григорием (Постниковым; впосл. митрополит). В 1852 г. на средства осташковского купца 1-й гильдии Н. К. Абабкова обновлена внутренняя отделка приделов.
В пожаре 1868 г. сгорело почти все внутреннее убранство собора, но конструкции устояли. Уже к ноябрю были изготовлены новые иконостасы приделов, после чего состоялось их освящение: 25 нояб. левого - в честь иконы Божией Матери «Знамение», 11 февр. 1869 г. правого - в честь Усекновения главы Иоанна Предтечи. В 1871-1872 гг. был изготовлен новый иконостас в главном храме (резьбу и позолоту выполнил Т. Е. Глазухин; иконы верхних ярусов написаны Н. И. Бабиным). 29 мая 1873 г. главный престол освящен архиеп. Тверским свт. Филофеем (Успенским; впосл. митрополит). В 1878 г. на средства мон. Афанасии (Орловой) были устроены новые придельные иконостасы.
В 1886 г. техник-строитель И. И. Демидов предложил план перестройки собора. В апр.- мае 1887 г. были разобраны теплый храм и колокольня, в 1887-1888 гг. под наблюдением Демидова († 13 марта 1888) и усилиями подрядчика И. Н. Суровкова были возведены новый теплый храм и колокольня в стиле эклектики. 2 февр. 1890 г. настоятелем Ниловой Столобенской пуст. архим. Арсением и игуменом осташковского Житенного мон-ря Алексием был освящен придел в честь Усекновения главы Иоанна Предтечи. 25 мая того же года архиеп. Тверской Савва (Тихомиров) освятил придел в честь иконы Божией Матери «Знамение». В углах перестроенных приделов разместили палатки для ризницы и б-ки. Новую колокольню венчал 6-угольный пирамидальный шпиль, отделанный белой жестью. После завершения строительства в том же стиле был оформлен основной объем, при этом полностью перестроено 5-главое завершение собора. В 1890-1893 гг. по сторонам основного объема возведены 2 новых придела: с правой стороны - в честь Перенесения Нерукотворного образа Спасителя, с левой - во имя Всех святых (Добровольский. 1901. С. 624). Внутри собор был заново расписан осташковскими и тверскими иконописцами.
II. Второй храм в мон-ре впервые появился по благословению патриарха Адриана, данному 16 февр. 1692 г. Это была теплая церковь в честь Усекновения главы Иоанна Предтечи, освященная в 1693 г. игуменом Ниловой Столобенской пуст. Пахомием. К 1719 г. церковь обветшала и к 1723 г. стараниями игум. Неониллы была отстроена заново и освящена игуменом Ниловой Столобенской пуст. Паисием. Этот храм был разобран в 1-й пол.- сер. 30-х гг. XVIII в.
III. В 1784-1793 гг. над вост. воротами мон-ря была возведена церковь в честь Тихвинской иконы Божией Матери в стиле классицизма на средства тайного советника В. И. Стрешнева (1707-1782), его жены А. Н. Стрешневой (в 1-м браке Шереметевой, урожд. Миклашевской; 1729-1785) и сестры жены М. Н. Миклашевской. Освящена в 1793 г. архиепископом Тверским Иринеем (Клементьевским). В пожаре 1868 г. практически полностью сгорело ее внутреннее убранство, однако к 1873 г. храм был восстановлен, а 3 июня того же года вновь освящен.
V. В 1760 г. на средства С. Я. Яковлева возведена каменная монастырская ограда с 4 башнями по углам и 3 воротами (длина ок. 600 м) (Успенский. 1890. С. 25). В 1862 г. после расширения территории мон-ря сев. часть ограды была перенесена и построена заново, в ней была устроена 5-я башня. В юго-зап. башне была оборудована часовня.
В 90-х гг. XIX в. за стенами О. З. м. построена каменная гостиница для паломников.
После закрытия собора (1928) в зимнем храме разместился зерносклад, а в летнем с 1930 г.- Осташковский краеведческий музей (Глафирова. 2017. С. 79). В 1930-1995 гг. в Вознесенском соборе хранились мощи прп. Нила Столобенского, до нач. 10-х гг. XXI в. находились его чудотворный скульптурный образ 80-х гг. XVIII в., список с чудотворной Владимирской Селигерской (Келейной) иконы Божией Матери. Церковь Тихвинской иконы Божией Матери была разрушена.
По ходатайству верующих Осташкова Вознесенский собор был возвращен РПЦ по решению председателя Совета по делам РПЦ при Совете Министров СССР Г. Г. Карпова в окт. 1946 г. (Рясенский Н. Ф. О св. мощах прп. Нила Столобенского. 1955 г. // Архив Ниловой Столобенской пуст. Ркп.). Богослужения возобновлены 30 марта 1947 г. В 1950 г. сооружена деревянная вызолоченная сень над мощами прп. Нила Столобенского. Настоятелем собора в 1955-1991 гг. был прот. В. И. Шуста, впосл. мон. Вассиан, ставший 1-м наместником возрожденной Ниловой Столобенской пуст. в сане архимандрита. 9 июля 1995 г. патриарх Московский и всея Руси Алексий II (Ридигер) возглавил перенос мощей прп. Нила Столобенского из Вознесенского собора в Богоявленский собор Ниловой Столобенской пуст. В храме находится темничка (скульптурное изображение Христа в темнице) с образом Христа в терновом венце из Ниловой Столобенской пуст. (1-я треть XIX в.).
В июле 2018 г. на территории бывш. мон-ря сгорели 6 деревянных келий.